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用elisa試劑盒檢測(cè)樣本的原理和步驟

表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)

（一）真核表達(dá)產(chǎn)物

1、   細(xì)胞上清（分泌性蛋白）

1.2、貼壁細(xì)胞或半貼壁，直接將細(xì)胞培養(yǎng)上清吸出，10000rmp x10min， 取上清，-20℃或4℃保存，作為標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，如有需要可進(jìn)行透析或純化處理；

1.2、不貼壁細(xì)胞，將培養(yǎng)基和細(xì)胞轉(zhuǎn)移至10ml離心管，500-800rmp x10min，吸取上清至另一10ml離心管中，10000rmp x10min， -20℃或4℃保存，作為標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，如有需要可進(jìn)行透析或純化處理；

2、   細(xì)胞裂解物（非分泌性蛋白）

2.1、貼壁細(xì)胞或半貼壁，直接將細(xì)胞培養(yǎng)上清吸出，然后用001M PBS（pH 7.4）將細(xì)胞吹下至10ml離心管，500-800rmp x10min，棄上清，沉淀轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管中， DDW重懸，置冰水浴中用超聲波裂解儀進(jìn)行裂解，10000rmp x10min，取上清，-20℃或4℃保存，作為標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，如有需要可進(jìn)行透析或純化處理；

2.2、不貼壁細(xì)胞，將培養(yǎng)基和細(xì)胞轉(zhuǎn)移至10ml離心管，500-800rmp x10min，棄上清，沉淀移至另一10ml離心管中，0.01M PBS（pH 7.4）重懸，500-800rmp x10min，棄上清，沉淀移至1.5ml離心管中， DDW重懸，置冰水浴中用超聲波裂解儀進(jìn)行裂解，10000rmp x10min，取上清， -20℃或4℃保存，作為標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，如有需要可進(jìn)行透析或純化處理。