elisa試劑盒中封閉的必要條件
(封閉)elisa試劑盒是繼包被之后用高濃度的無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過(guò)程??乖蚩贵w包被時(shí)所用的濃度較低,吸收后固相載體表面尚有未被占據(jù)的空隙,封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙,從而排斥在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)其后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。封閉的手續(xù)與包被相類似。zui常用的封閉劑是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白,也有用10%的小牛血清或1%明膠作為封閉劑的。脫脂奶粉也是一種良好的封閉劑,其zui大的特點(diǎn)是價(jià)廉,可以高濃度使用(5%)。高質(zhì)量的速溶食用低脂奶粉即可直接當(dāng)作封閉劑使用,但由于奶粉的成份復(fù)雜,而且封閉后的載體不易長(zhǎng)期保存,因此在試劑盒的制備中較少應(yīng)用。
封閉是否必要,取決于elisa試劑盒的模式及具體的實(shí)驗(yàn)條件。并非所有的ELISA固相均需封閉,封閉不當(dāng)反而會(huì)使陰性本底增高。一般說(shuō)來(lái),雙抗體夾心法,只要酶標(biāo)記物是高活性的,操作時(shí)洗滌*,不經(jīng)封閉也可得到滿意的結(jié)果。特別是用單抗腹水直接包被時(shí),因其中大量非抗體蛋白在包被時(shí)同樣也吸附在固相表面,業(yè)已起到了類似封閉劑的作用。但在間接法測(cè)定中,封閉一般是不可少的。包被好的ELISA板干燥后放入密封袋或錫袋中,在低溫可保存數(shù)月。
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